Es wir nach einer Mutation in der amplifizierten DNA gefragt. Durch diese Mutation geht eine Erkennungsstelle für das benutzte Restriktionsenzym verloren, d.h. dass an dieser Stelle das Enzym die DNA nicht mehr schneiden kann. Dadurch entsteht natürlich ein längeres Fragment dass dann die 8kB plus die 4kB beinhaltet also 12kB. Die anderen Schnittstellen sind bei dieser Mutation nicht betroffen und so entstehen weiterhin Fragmente mit Längen von 2kB und 6Kb.