Monozyten und TLR-Liganden

[andre1983]

Vielleicht etwas speziell die Fragen, aber:

ich will meine Monozyten mit verschiedenen TLR-Liganden stimulieren, benutze
- poly(I:C)
- Peptidoglycan
- Loxoribine
- Muramyl Dipeptide

- alle von Sigma bestellt

- ich benutze humane PBMCs (isoliere diese durch Ficoll aus EDTA-Blut) und gebe diese auf eine 24 oder 96 Well-Platte. Ich lasse dann die Monozyten adhärieren und wasche nach ca. 2-3h alle anderen Zellen weg.
Das mit den ausdifferenzierten Zellen ist etwas schwieriger:
- ich habe schon beides versucht - die Zellen nach 24 bis 48h über Nacht stimuliert bzw. 6h
- M-CSF dazugegeben und die Zellen zu Makrophagen ausdifferenzieren lassen und dann stimuliert
- ich bestimme nur die Zellzahl der dazugegebenen PBMCs mittels Zählkammer

Ich messe nach der Stimulation TNF-A mittels Elisa von BD, leider sind sind Konzentrationen teilweise sehr gering.
Kennt sich jemand aus bzw. kennt eine Publikation mit humanen Monozyten?

Für Hilfe wäre ich sehr dankbar,
André

[Flemingulus]

Erstmal nur ein paar allgemeine Fragen:

Hast Du isolierte Blut-Monozyten oder differenzierte HL-60-Zellen (oder was ganz anderes)?

Wie misst Du TNF-Alpha? ELISA? Nach verschieden langen Zeiträumen? Wie kontrollierst Du auf die jeweilige Zellzahl?

[cKone]

Publikationen dazu wirds wahrscheilnich wie Sand am Meer geben.
Protokolle bzw. Erfahrungen kann man recht gut unter http://www.protocol-online.org austauschen.

Ansonsten kann ich dir http://elib.uni-stuttgart.de/opus/gemeinsame_suche.php
empfehlen. Mit dieser Suchmaschine kannst du alle online verfügbaren Dissertationen nach bestimmten Suchbegriffen abfragen.

P.S.:
Bei Sigma wäre ich bezüglich Stimuli immer vorsichtig (nur als Tip für zukünftige Versuche)